本书根据作者讲授课程讲义编写而成,包含12个实验项目,如分子克隆、蛋白表达纯化、酶活检测、探针标记、质谱鉴定以及生物成像等。
全书共12个实验项目,包括质粒提取与PCR扩增,质粒转化,蛋白质荧光标记,酶活检测,RNA提取与测定,FTO蛋白表达量检测,细胞成像,过氧化物酶活性检测,利用光交联非天然氨基酸鉴定蛋白-蛋白互作(两次实验),基于活性的蛋白质组分析(两次实验)。每个实验由实验目的、实验背景、实验原理、实验操作、思考题等五部分组成,条理清晰,内容详实,部分实验后有附录与参考文献等扩展内容。
本书适合作为高等院校化学及生物相关专业本科生教材。
北京大学化学与分子工程学院化学生物学实验教学组
----------------------------
本书由北京大学化学与分子工程学院化学生物学实验教学组撰写。负责人王初,化学学院教授,前沿交叉学院副院长,化学“101计划”化学生物学实验课程牵头人;高珍,化学实验教学中心教师,参与并编写《化学实验室安全只是教程》。
实验一 质粒提取、聚合酶链式反应扩增及琼脂糖凝胶电泳检测
实验二 质粒的转化和蛋白质的纯化
实验三 变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分析和蛋白质荧光标记
实验四 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测m6A去甲基酶FTO体外酶活性
实验五 细胞总RNA的提取、测定与基因表达量的检测
实验六 FTO蛋白表达量的蛋白质免疫印记检测
实验七 基于点击化学和免疫荧光的细胞成像
实验八 过氧化物酶的酶活动力学
实验九 利用光交联非天然氨基酸鉴定蛋白-蛋白互作(一)——非天然氨基酸定点插入诱导的蛋白-蛋白共价交联
实验十 利用光交联非天然氨基酸鉴定蛋白-蛋白互作(二)——胶内酶切质谱样品的制备
实验十一 基于活性的蛋白质组分析(一)——探针标记及荧光凝胶成像
实验十二 基于活性的蛋白质组分析(二)——同位素标记蛋白质组的定量分析
附录1 常规仪器和耗材
附录2 实验试剂准备